CRISPR/Cas9 技術(shù)的成熟，使基因編輯逐漸從模式細(xì)胞系走向原代細(xì)胞和臨床相關(guān)細(xì)胞模型。然而，在實(shí)際操作中，許多實(shí)驗(yàn)人員很快會(huì)遇到一個(gè)現(xiàn)實(shí)問(wèn)題：

CRISPR 體系本身并不難，難的是如何把它高效、溫和地送進(jìn)原代細(xì)胞。

在這一背景下，電轉(zhuǎn)染逐漸成為原代細(xì)胞 CRISPR 實(shí)驗(yàn)中的主流選擇之一。

一、CRISPR/Cas9 在原代細(xì)胞中的遞送難點(diǎn)

與常規(guī)細(xì)胞系相比，原代細(xì)胞在進(jìn)行 CRISPR 編輯時(shí)往往面臨多重挑戰(zhàn)：

• 對(duì)外界刺激高度敏感

• 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞存活率要求高

• 編輯效率需要穩(wěn)定、可重復(fù)

• 遞送時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能引發(fā)非特異效應(yīng)

這些特點(diǎn)決定了：
?? CRISPR 在原代細(xì)胞中的遞送方式，往往比編輯工具本身更關(guān)鍵。

二、化學(xué)轉(zhuǎn)染在 CRISPR 原代細(xì)胞應(yīng)用中的局限

脂質(zhì)體等化學(xué)轉(zhuǎn)染方法在 CRISPR 實(shí)驗(yàn)中仍被廣泛使用，但在原代細(xì)胞中常出現(xiàn)以下問(wèn)題：

1. 遞送效率不穩(wěn)定
   化學(xué)轉(zhuǎn)染依賴內(nèi)吞過(guò)程，而原代細(xì)胞內(nèi)吞活性有限，導(dǎo)致 Cas9 或核酸進(jìn)入細(xì)胞比例偏低。

2. 細(xì)胞毒性難以控制
   為提高編輯效率而增加試劑用量，往往會(huì)顯著降低細(xì)胞存活率。

3. 作用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)
   質(zhì)?；蚝怂嵩诩?xì)胞內(nèi)持續(xù)表達(dá)，可能增加脫靶風(fēng)險(xiǎn)。

在對(duì)安全性和可控性要求更高的原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，這些問(wèn)題尤為突出。

三、電轉(zhuǎn)染在 CRISPR 原代細(xì)胞中的優(yōu)勢(shì)

電轉(zhuǎn)染通過(guò)瞬時(shí)電場(chǎng)在細(xì)胞膜上形成短暫通道，使 Cas9 及其相關(guān)組分直接進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，從機(jī)制上規(guī)避了內(nèi)吞限制。

在 CRISPR 原代細(xì)胞應(yīng)用中，電轉(zhuǎn)染的優(yōu)勢(shì)主要體現(xiàn)在：

• 遞送過(guò)程快速、直接

• 不依賴細(xì)胞內(nèi)吞活性

• 對(duì)細(xì)胞類型的適應(yīng)性更強(qiáng)

尤其在原代細(xì)胞、免疫細(xì)胞等難轉(zhuǎn)染模型中，其穩(wěn)定性優(yōu)勢(shì)更加明顯。

四、RNP 遞送方式與電轉(zhuǎn)染的協(xié)同優(yōu)勢(shì)

近年來(lái)，越來(lái)越多實(shí)驗(yàn)室采用 Cas9–sgRNA RNP（核糖核蛋白）復(fù)合物 進(jìn)行 CRISPR 編輯，其優(yōu)勢(shì)包括：

• Cas9 在細(xì)胞內(nèi)作用時(shí)間短

• 脫靶風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)降低

• 編輯過(guò)程更可控

而電轉(zhuǎn)染正好與 RNP 遞送方式高度匹配：

• 可實(shí)現(xiàn)瞬時(shí)、高效遞送

• 不需要轉(zhuǎn)錄和翻譯過(guò)程

• 有利于提高編輯效率與一致性

因此，在原代細(xì)胞 CRISPR 應(yīng)用中，“RNP + 電轉(zhuǎn)染"正在成為主流技術(shù)路線。

五、微量電轉(zhuǎn)染技術(shù)的進(jìn)一步優(yōu)化

傳統(tǒng)電轉(zhuǎn)染在原代細(xì)胞中仍可能帶來(lái)一定損傷。為此，近年來(lái)出現(xiàn)的微量電轉(zhuǎn)染（Microporation）技術(shù)通過(guò)：

• 縮小轉(zhuǎn)染體積

• 優(yōu)化電場(chǎng)均勻性

• 減少熱效應(yīng)

在保證 CRISPR 編輯效率的同時(shí)，進(jìn)一步提升了細(xì)胞存活率，使其更適合用于珍貴樣本和功能研究。

在這一技術(shù)路線下，部分新型臺(tái)式電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)已被應(yīng)用于原代細(xì)胞和免疫細(xì)胞的 CRISPR 實(shí)驗(yàn)中，用于實(shí)現(xiàn)更加穩(wěn)定、可重復(fù)的編輯效果。

六、聯(lián)系我們

在 CRISPR/Cas9 原代細(xì)胞研究中，遞送方式正在從“輔助手段"轉(zhuǎn)變?yōu)椤瓣P(guān)鍵環(huán)節(jié)"。
隨著對(duì)編輯效率、安全性和重復(fù)性要求的不斷提高，電轉(zhuǎn)染，尤其是基于微量電轉(zhuǎn)染理念的技術(shù)方案，正逐漸成為越來(lái)越多實(shí)驗(yàn)室的選擇。

如需了解 CRISPR/Cas9 在原代細(xì)胞中的電轉(zhuǎn)染思路或相關(guān)技術(shù)方案，可聯(lián)系相關(guān)技術(shù)支持獲取進(jìn)一步信息。