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為什么高通量實驗更容易失敗？密封材料往往被嚴重低估

在高通量實驗、并行反應和條件篩選中，研究人員通常會重點關(guān)注反應體系本身，例如溶劑、試劑比例或反應條件設置，而對反應體系的密封方式關(guān)注不足。事實上，在多孔板實驗中，密封材料往往直接影響實驗的重復性和數(shù)據(jù)可靠性。尤其是在使用有機溶劑、易揮發(fā)試劑或進行長時間反應時，密封不當極易引發(fā)一系列問題。高通量實驗中，密封環(huán)節(jié)常見的三大問題1.溶劑揮發(fā)導致條件漂移在圓孔（RoundWell）多孔板中，如果封膜對溶劑阻隔能力不足，不同孔位的溶劑揮發(fā)速率會產(chǎn)生差異，直接影響反應濃度和反應速率。2....

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CRISPR/Cas9 原代細胞轉(zhuǎn)染，為什么越來越多實驗室選擇電轉(zhuǎn)染？

CRISPR/Cas9技術(shù)的成熟，使基因編輯逐漸從模式細胞系走向原代細胞和臨床相關(guān)細胞模型。然而，在實際操作中，許多實驗人員很快會遇到一個現(xiàn)實問題：CRISPR體系本身并不難，難的是如何把它高效、溫和地送進原代細胞。在這一背景下，電轉(zhuǎn)染逐漸成為原代細胞CRISPR實驗中的主流選擇之一。一、CRISPR/Cas9在原代細胞中的遞送難點與常規(guī)細胞系相比，原代細胞在進行CRISPR編輯時往往面臨多重挑戰(zhàn)：對外界刺激高度敏感轉(zhuǎn)染后細胞存活率要求高編輯效率需要穩(wěn)定、可重復遞送時間過長可...

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OD600 到底能不能用超微量分光光度計來測？

在細菌培養(yǎng)、蛋白表達和生長狀態(tài)判斷中，OD600是實驗室常用、也是最容易被“想當然”的指標之一。一個被頻繁問到的問題是：OD600能不能用超微量分光光度計來測？會不會不準？答案并不是簡單的“能”或“不能”，而是：取決于你“為什么測OD600”，以及“你需要它來做什么判斷”。一、先說結(jié)論?可以用超微量分光光度計測OD600?但并不是所有OD600場景都適合如果不區(qū)分使用場景，就容易出現(xiàn)兩種認知：一種覺得“超微量測OD600都不靠譜”另一種覺得“只要能出數(shù)就行”這兩種看法都不完整...

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原代細胞轉(zhuǎn)染效率低？實驗中常被忽視的幾個關(guān)鍵原因

在基因編輯、細胞功能研究和轉(zhuǎn)化醫(yī)學實驗中，原代細胞轉(zhuǎn)染始終是一個繞不開的技術(shù)難點。不少實驗人員都有類似經(jīng)歷：在常規(guī)細胞系中效果良好的轉(zhuǎn)染方案，一旦應用到原代細胞中，轉(zhuǎn)染效率明顯下降，甚至伴隨嚴重的細胞死亡。那么，原代細胞轉(zhuǎn)染失敗的原因究竟在哪里？一、原代細胞與常規(guī)細胞系的本質(zhì)差異與HEK293、HeLa等永生化細胞系相比，原代細胞通常具有以下特點：內(nèi)吞活性較低對外界刺激高度敏感對培養(yǎng)條件依賴性強修復能力有限這意味著：??原代細胞并不“適合”依賴內(nèi)吞機制的轉(zhuǎn)染方式。二、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)...

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原代細胞與免疫細胞轉(zhuǎn)染為什么這么難？一種更穩(wěn)定的電轉(zhuǎn)染解決方案

在基因編輯、細胞治療和免疫研究中，高效、低損傷的細胞轉(zhuǎn)染始終是實驗成功的關(guān)鍵步驟之一。然而，許多實驗人員都有相同的困擾：脂質(zhì)體在常規(guī)細胞系中效果尚可，但一遇到原代細胞、干細胞或免疫細胞，轉(zhuǎn)染效率和細胞存活率往往難以兼顧。針對這一難題，基于微量電轉(zhuǎn)染（Microporation）技術(shù)的ExTransfection™電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，正在成為越來越多實驗室的選擇。一、為什么傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染方法在原代細胞中頻頻失效？1??脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的天然局限脂質(zhì)體依賴細胞的內(nèi)吞機制，而原代細胞、T細...

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